期刊简介
《中华胰腺病杂志》反映国内胰腺疾病研究成果，促进国内胰腺病的学术交流，传播国内外胰腺疾病学领域的新理论、新技术和新经验，推动我国胰腺病学的发展。
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- 杂志名称：中华胰腺病杂志
- 主管单位：中华胰腺病学杂志；胰腺病学
- 主办单位：中国科学技术协会
- 国际刊号：11-5667/R
- 国内刊号：11-5667/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：2002年获第三届华东地区优秀期刊奖期刊收录：CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
肽核酸钳制-PCR检测K-ras突变法的阳性判断阈值及检测下限的研究
丁佳寅；高军；李泉江；金晶；吴洪玉；满晓华；李兆申
关键词：K-ras基因, 突变, 肽核酸类, 聚合酶链反应
摘要：目的 确定肽核酸钳制-PCR(PNA-PCR)检测K-ras突变的阳性判断阈值(Cut off)和检测下限.方法 将含K-ras基因12或13密码子突变的胰腺癌细胞株PANC1、SW1990基因组DNA以不同的浓度分别与K-ras野生型的胎盘DNA混合配制成含不同突变率(0、0.1％、0.2％、0.4％、0.8％、1.6％、3.1％、6.25％、12.5％、25％、50％)的样本,并制备1％突变率PANC1细胞及30％突变率SW1990细胞DNA总量分别为50、20、5、1 ng和50、10、5、1 ng的样本.应用PNA-PCR方法检测样本中的K-ras基因12、13密码子突变,收集它们的突变Ct值、总体Ct值,并计算出△Ct值(突变Ct值-总体Ct值).实验重复10次.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析△Ct值,确定K-ras基因突变的适Cutoff值,计算诊断阳性率及确定诊断下限.结果 所有不同突变率的PANC1细胞12密码子突变以及SW1990细胞13密码子突变的突变Ct值及△Ct值与阴性对照样本的差异均有统计学意义(P值均＜0.05),而总体Ct值与阴性对照样本的差异无统计学意义.诊断K-ras基因12密码子突变的ROC曲线下面积(AUC)为0.926,适Cut off值为11,相应的敏感度和特异度为84％和100％,检出下限为0.4 ng;诊断K-ras基因13密码子突变的AUC为0.906,适Cut off值为9.5,相应的敏感度和特异度为71％和100％,检测下限为1.5ng.固定突变率的检测结果进一步确定上述的检测下限.结论 成功确立了PNA-PCR法检测K-ras基因12、13密码子突变的Cut off值和检测下限,达到临床应用的要求.
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